Miwelerde we gök önümlerde oksalat kislotasynyň mukdaryny ýokary netijeli suwuklyk hromatografiýasy (HPLC) arkaly kesgitlemek

Kesgitleme Oksalik kislotasy Ýokary öndürijilikli suwuk hromatografiýa (HPLC) arkaly miweleriň we gök önümleriň mazmuny
1. Eksperimental prinsip we usul dizaýny
Miwelerde we gök önümlerde umumy organiki kislota hökmünde, oksalat kislotasynyň mukdary iýmitiň tagamyna we iýmitlik gymmatyna gönüden-göni täsir edýär. Bu tejribede tersine fazaly ýokary öndürijilikli suwuk hromatografiýasy (RP-HPLC) ulanylýar. Kislotaly hereketli faza şertlerinde oksalat kislotasy C18 hromatografik sütünini ulanyp, päsgel berýän maddalardan başlangyç derejede bölünýär. Mukdar seljermesi üçin oksalat kislotasynyň molekulalaryndaky karboksil toparlarynyň UB siňdiriş häsiýetlerine esaslanyp, 210 nm-de goýlan ultramelewşe detektor ulanylýar.
2. Standart egri we nusga taýýarlamak
Standart erginleri taýýarlamak üçin gradient suwuklandyrma usuly ulanylýar: 25,0 mg oksalat kislotasy digidratyny takyk ölçäp, 1 mg/ml esasy ergin almak üçin ultra arassa suw bilen 25 ml-e çenli suwuklandyryň. Bu ergin yzygiderli 50, 100, 200, 400 we 800 µg/ml-de birnäçe standart erginlere suwuklandyrylýar, her bir konsentrasiýa üç esse girizilýär.
Nusga taýýarlamak üçin mikrotolkunly peç arkaly ekstraksiýa ulanylýar: 5.00 g miwe/gök önüm gomogenatynyň agramyny alyň, 10 ml 0.1 mol/L duz kislotasynyň erginini goşuň, 60°C-da mikrotolkunly peç bilen 10 minutlap işleň, 0.45 µm membrana süzgüjinden süzüň we synag üçin filtraty ýygnaň.
3. Hromatografik şertleri optimizirlemek
Hereketli faza 0,01 mol/L kaliý digidrogen fosfat buferi (pH 2,5)-asetonitril (95:5) ulgamy bolup, akym tizligi 0,8 ml/min we sütün temperaturasy 35°C bolýar. Asetonitril paýyny sazlamak, organiki faza 10% -den geçende oksalat turşusynyň saklanma wagtynyň 3 minutdan az gysgalýandygyny, ýöne iň ýokary galyndynyň bolýandygyny görkezýär. Soňky optimizirlenen şertlerde oksalat turşusynyň saklanma wagty 4,2 minut bolup, goňşy limon turşusyndan we alma turşusyndan doly aýrylmaga ýetýär (rezolýusiýa > 1,5).
4. Usulyň tassyklanmasy
Çyzykly diapazon barlagy 10–1000 µg/ml aralygynda pik meýdany bilen konsentrasiýanyň arasynda gowy çyzykly gatnaşygy görkezýär (R² = 0.9993). Signal-şowhun gatnaşygy usuly bilen kesgitlenýän anyklaýyş çägi (LOD) 0.5 µg/ml-e deňdir. Gaýtalanýanlyk synaglarynda, şol bir ispanak nusgasynyň alty gaýtalanýan kesgitlemeleri üçin RSD 1.8% -e deňdir. Üç derejede (80%, 100% we 120%) spike dikeltmek synaglary ortaça 98.2%, 102.4% we 97.8% dikeltmekleri berýär, bu bolsa mukdary seljermegiň talaplaryna laýyk gelýär.
5. Hakyky nusgalaryň seljermesi
Söwda taýdan elýeterli bolan alty miwe we gök önüm synagdan geçirildi: ispanak (356 ± 12 mg/100 g), seldereý (215 ± 9 mg/100 g), pomidor (18 ± 2 mg/100 g), alma (6 ± 1 mg/100 g), banan (anyklanmady) we brokkoli (89 ± 5 mg/100 g). Milli standart usul (GB 5009.277-2016) bilen deňeşdirme iki usulyň arasyndaky deňeşdirme üýtgeşikliginiň 5%-den azdygyny görkezýär, bu bolsa bu usulyň ygtybarlylygyny tassyklaýar. Hususan-da, HPLC usuly pes mazmunly nusgalary seljerende däp bolan titrleme usullaryndan has ýokary duýgurlyk görkezýär.
6. Esasy bellikler
Nusga öňünden işlenilende pH gymmatyny berk gözegçilikde saklaň. Ekstraktyň pH derejesi 3-den geçse, kalsiý oksalat çökündisi synag netijeleriniň pes bolmagyna getirer. Duz çökündisiniň we sütünleriň dykylmagynyň öňüni almak üçin hereketli faza her gün täze taýýarlanmalydyr. Her 20 inýeksiýadan soň, sütün netijeliliginiň peselmeginiň öňüni almak üçin sütün 30 minutlap asetonitril-suw bilen (30:70) ýuwuň. Pigment saklaýan nusgalar üçin (meselem, gyrmyzy kelem), inýeksiýadan öň gaty fazaly ekstraksiýa arassalaýyş ädimini goşmak maslahat berilýär.
7. Ulanyş we giňeltmegiň görkezmeleri
Bu usuly siýdik we gan ýaly biologik nusgalarda oksalat turşusyny anyklamaga çenli giňeltmek mümkin. Hereketli faza düzümini sazlamak arkaly (meselem, tetrabutilamonium gidroksidini goşmak bilen) oksalat turşusyny we onuň metabolitlerini bir wagtda kesgitlemek mümkin. Mass spektrometriýa detektory bilen utgaşdyrylanda, has takyk yzlary anyklamak usuly döredilip bilner. Azyk gaýtadan işleýän senagatda bu usul pes oksalat turşusynyň görnüşlerini saýlamak we bişirmek proseslerini optimizirlemek üçin möhüm maglumat goldawyny berip biler.